pewarnaan bakteri

MAKALAH
PEWARNAAN BAKTERI

Disusun Oleh

1.   Maria Parama T.D              (A102.10.042)

2.   Myka Widyastuti                        (A102.10.047)

3.   Ulfa Nur F. J                       (A102.10.065)

                                

AKADEMI ANALIS KESEHATAN NASIONAL SURAKARTA

2014/2015

KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa atas limpahan rahmat-Nya sehingga penulis mampu menyelesaikan makalah ini. Makalah ini disusun sebagai salah satu tugas yang diberikan dosen guna memenuhi nilai. Makalah ini tidak dapat terselesaikan tanpa bantuan dari berbagai pihak. Oleh karena itu pada kesempatan ini penulis menyampaikan terima kasih kepada pihak-pihak yang telah membantu kami.

Penulis menyadari bahwa dalam proses penyusunan makalah ini tentunya tidak terlepas dari segala kekurangan maupun kelebihannya. Oleh karena itulah, kritik dan saran yang membangun dari para pembaca sangat penulis butuhkan demi kesempurnaan penyusunan makalah ini.

Surakarta, September 2014

Hormat Kami

Penulis

BAB I

PENDAHULUAN

Bakteri atau mikroba lainnya dapat dilihat dengan mikroskop bisasa tanpa harus dilakukan pengecatan terlebih dahulu. Tetapi pengamatan yang dilaksanakan tanpa pengecatan lebih sulit dan tidak dapat dipakai untuk melihat bagian bagian sel dengan jelas, karena sel bakteri atau mikroba lainnya bersifat transparan atau semi transparan.

Dalam bidang Mikrobiologi dikenal beberapa teknik pewarnaan terhadap bakteri yang pada dasarnya adalah merupakan reaksi ikatan antara zat warna dengan komponen-komponen pada bakteri terutama yang terdapat pada dinding sel dan sitoplasma.

Dengan pengecatan maka struktur sel mikroba dapat dilihat lebih seksama. Fungsi pengecatan terutama memberi warna pada sel- sel atau bagian-bagian lain, sehingga menambah daya kontras dan membuat lebih jelas. Selain itu pengecatan dapat untuk menunjukkan bagian-bagian struktur sel, menunjukkan distribusi dan susunan kimia bagian-bagian sel, membedakan mikroba satu sama lain.

BAB II

PEMBAHASAN

A.    Dasar pewarnaan bakteri

Pewarnaan bakteri menurut cat yang diikat oleh sel bakteri dibagi menjadi dua, yaitu cat basa dan cat asam. Cat basa adalah garam-garam cat yang ionnya merupakan kation (bermuatan positif) misalnya methylene blue, safranin. Cat basa digunakan untuk mewarnai sel bakteri. Sedangkan cat asam adalah garam-garam cat yang ionnya anion. Cat ini digunakan untuk mewarnai latar belakang, contohnya eosin. Pewarna-pewarna basa lebih sering digunakan untuk pewarnaan bakteri. Adanya muatan negatif pada permukaan bakteri menyebabkan tertolaknya sebagian besar pewarna-pewarna asam sehingga mencegah pewarna-pewarna asam tesebut untuk berpenetrasi ke dalam sel.

B.     Tujuan Pewarnaan

                     1.      Memberi warna pada sel-sel atau bagian-bagian lain, sehingga menambah daya kontras dan tampak lebih jelas.

                     2.      Membedakan sel bakteri satu dengan yang lain.

                     3.      Mengidentifikasi bagian-bagian/ struktur-struktur sel mikroorganisme

                     4.      Mengamati dengan lebih baik suatu morfologi mikroorganisme

C.     Jenis-jenis pewarnaan

1.      Pewarnaan sederhana

adalah pewarnaan yang hanya menggunakan pewarna tunggal. Tujuannya adalah untuk mengetahui bentuk morfologis sel bakteri (coccus,basilus, dan spiral ) dan susunannya (rantai, berkelompok, berpasangan, dan tetrad). Prinsip pewarnaan sederhana adalah  bakteri hanya akan mengikat satu macam cat tunggal sesuai dengan cat yang diberikan. Cat yang dapat digunakan adalah cat safranin, methylene blue, gentian violet, basic fuchin dan anilin basa.

ù  Coccus, berbentuk bulat, yaitu :

a . Monococcus

            Mono = tunggal

b. Diplococcus

            Diplo = coccus berpasangan

c. Streptococcus

            Strepto = berantai

d. Stafilococus

Stafilo = coccus berkelompok

e. Tetracoccus

Tetrad = 4 cocus berkelompok

                                    e. Sarcinacoccus

                                                Sarsina = 8 cocus berkelompok

ù  Basilus, berbentuk batang, yaitu :

a. Monobasil

Mono = tunggal

b. Diplobasilus

            Diplo = berpasangan

c. Streptobasilus

Strepto = berantai

ù  Spiral, kaku atau lentur, yaitu :

a. Spiral

Bentuk sel bergelombang. Contoh : Thiospirillopsis floridina (bakteri belerang).

b. Bakteri Vibrio (koma)

Bentuk sel seperti tanda baca koma. Contoh : Vibrio cholera (penyebab penyakit kolera).

c. Bakteri Spiroseta

Sel seperti sekrup. Contoh : Treponema pallidum (penyebab penyakit kelamin sifilis).

.

2.      Pewarnaan diferensial

Adalah pewarnaan yang menggunakan dua pewarna yang berlawanan yang  digunakan untuk membedakan sifat-sifat sel bakteri. Pewarnaan diferensial terdiri dari 2 macam, yaitu

a.       Pewarnaan Diferensial Gram

Pewarnaan Gram digunakan untuk membedakan spesies bakteri menjadi dua kelompok ( Gram positif dan Gram negatif ), berdasarkan sifat kimia dan fisik dinding sel. Metode ini diberi nama berdasarkan penemunya, ilmuwan denmark hans Christian gram 1884. Bakteri gram positif memiliki dinding sel yang tebal dan membran sel selapis.  Karena bakteri Gram positif bakteri yang dapat menahan kompleks pewarnaan primer ungu Kristal iodium sampai akhir prosedur dan sel bakteri berwarna biru gelap atau ungu. Sedangkan bakteri gram negatif merupakan bakteri yang kehilangan kompleks ungu Kristal pada waktu pembilasan dengan alkohol namun kemudian terwarnai dengan pewarnaan tandingan, yaitu safranin sehingga sel-sel tampak berwarna merah muda pada akhir pewarnaan dan mempunyai dinding sel tipis yang berada di antara dua lapis membran sel kegunaannya yaitu, untuk melihat atau mengamati bentuk-bentuk sel bakteri dan memberikan sifat reaksi pewarnaan bakteri yang dapat diketahui dengan melihat apakah termasuk gram negatif (berwarna merah) atau gram positif (berwarna biru).

Dalam melakukan pewarnaan Gram terdapat empat macam tahap yang dilakukan antara lain adalah pemberian warna utama Gram A berupa larutan Kristal violet berwarna ungu. Selanjutnya adalah pengintensifan warna utama gram B berupa larutan kalium iodida kemudian pencucia dekolorisasi Gram C berupa alcohol. Dan yang terakhir adalah pemberian warna penutup/pewarna tandingan/counterstain Gram D larutan safranin berwarna merah muda. Ada dua teknik untuk membekukan prosedur warna Gram yang hasilnya setara ialah teknik Hucker dan teknik Burke. Teknik Burke dalam prosedur ini dikenakan pada sel bakteri yang telah difiksasi, hasil pewarnaan pada bakteri Gram positif berwarna ungu, sedangkan pada bakteri Gram negatif berwarna merah muda.

Perbedaan Bakteri Gram (+) dengan Bakteri Gram (-)

Gram (+)	Gram (-)
Ø  Dinding gram (+) -          Ketebalan lapisan peptidoglikan 50-90% dari dinding sel -           Asam telkoat	Ø  Dinding Gram (-) -          Ketebalan dinding peptidoglikan 10% dari dinding sel -           Lemak              ( Lipopolisakarida)

v  Contoh bakteri Gram (+)

-          Bacillus sp

-          Staphylococcus sp

-          Sterptococcus sp

v  Contoh bakteri Gram (-)

-          Neisseria sp

-          Shigella sp

-          Klebsiella sp

b.      Pewarnaan Basil  Tahan Asam (BTA)

Pewarnaan Basil Tahan Asam yang biasa digunakan adalah metode Ziehl Nelsen (ZN). Pewarnaan BTA digunakan untuk membedakan bakteri kedalam kelompok tahan asam dan tidak tahan asam. Bila zat warna yang telah terpenetrasi tidak dapat dilarutkan dengan alkohol asam, maka bakteri tersebut disebut tahan asam sedangkan sebaliknya disebut tidak tahan asam. Meskipun sebagian besar organisme bakteri dapat diwarnai dengan baik dengan prosedur pewarnaan sederhana maupun gram, beberapa genus terutama genus Mycobacterium, jauh lebih baik bila dilakukan pengecatan metode tahan asam, karena Mycobacterium tuberculosis dan Mycobacterium leprae mewakili bakteri patogen terhadap manusia, pewarnaan ini memiliki nilai diagnostik dalam identifikasi organisme-organisme tersebut. Bakteri genus Mycobacterium pada dinding selnya mengandung banyak zat lipid (lemak) sehingga bersifat permeable dengan pewarnaan biasa.

Prinsip pewarnaan Basil tahan asam (BTA) adalah tahan terhadap pencucian dengan alkohol asam, walau telah dicuci dengan alkohol asam bakteri tahan asam tidak melepaskan zat warna yang telah diikatnya. Bakteri tahan asam akan berwarna merah dan bakteri tidak tahan asam berwarna biru.

3.      Pewarnaan Negatif

Adalah pewarnaan yang digunakan untuk mewarnai latar belakangnya sedangkan sel bakteri tidak terwarnai. Cat yang digunakan adalah tinta china. Karena yang terwarnai adalah latarbelakangnya maka sel bakteri akan berwarna transparan dengan latar belakang hitam. Pewarnaan ini digunakan untuk bakteri yang sulit mengikat cat karena daya afinitas pengikatan cat oleh sel bakteri rendah. Contoh bakteri yang menggunakan pengecatan ini adalah Leptospira sp. , Treponema sp. , dan Borrelia sp.

4.      Pewarnaan khusus

Pewarnaan khusus adalah pewarnaan yang digunakan untuk mewarnai bagian-bagian sel bakteri, misalnya flagel, spora, dan kapsul.

a.       Pewarnaan kapsul

Kapsul merupakan lapisan luar bergelatin yang disekresikan oleh sel dan yang mengelilingi serta menempel pada dinding sel. Pewarnaan kapsul lebih sulit dibandingkan dengan jenis prosedur pewarnaan diferensial lainnya karena bahan kapsul bersifat larut air dan dapat dilepaskan dengan pembilasan berlebih.

Pewarnaan kapsul yang sering digunakan adalah metode Burry. Metode Burry adalah kombinasi dari pewarnaan negatif dan sederhana. Prinsip pewarnaan kapsul metode burry adalah kapsul akan berwarna transparan, sel bakteri akan berwarna merah atau biru sesuai dengan cat yang diberikan dengan latar belakang hitam.

Ø  Contoh kuman berkapsul yaitu :

            1.Klebsiella pneumoniae

            2. Bacillus subtilis

            3. Serratia marcencent

b.      Pewarnaan Spora

Anggota-anggota genus anaerob Clostridium dan  Desulfotomaculum dan genus aerob Basilus adalah contoh organisme-organisme yang mempunyai kapasitas sebagai sel-sel vegetatif yang aktif secara metabolik maupun sebagai tipe sel yang tidak aktif secara metabolik dan sangat resisten, yaitu disebut spora.

Letak spora ada 3 macam: sentral, yaitu letak spora berada di tengah-tengah sel,  terminal, yaitu letak spora ada diujung sel, sub terminal, yaitu letak spora diantara ujung dan di tengah-tengah sel. Spora bersifat resisten terhadap panas, kekeringan , dan zat kimiawi. Bila kondisi lingkungan telah baik kembali spora dapat kembali melakukan gemisasi dan memproduksi sel vegetative. Pewarnaan spora menggunakan cat malachit green dan safranin. Prinsipnya adalah spora akan berwarna hijau, sel bakteri akan berwarna merah dengan latar belakang merah muda apabila dilakukan pengecatan spora dengan metode schaeffer fulton. Pemanasan pada pewarnaan ini bertujuan untuk melunakkan spora agar cat malachit green dapat menembus spora.

c. Pewarnaan Flagel

Flagel merupakan komponen tambahan  dari sel yang menyerupai benang, terdiri dari protein Flagelin. Berdasarkan letak flagel pada bakteri ada 4 jenis flagel :

1)      Atrik,tidak mempunyai flagel

2)      Monotrik, flagel tunggal pada salah satu ujung

3)      Lofotrik, terdapat 1/lebih flagel disalah satu ujung

4)      Amfitrik, terdapat 1/lebih flagel di kedua ujung

5)      Peritrik, flagel terbesar diseluruh badan kuman

Flagel merupakan organel sel yang tidak dapat dilihat dengan pewarnaan biasa. Salah satu pewarnaan yang digunakan untuk melihat flagel adalah pewarnaan Gray. Pada metode ini sel bakteri akan berwarna ungu muda sedangkan flagel akan berwarna ungu lebih muda dengan latar belakang merah muda.

BAB III

PENUTUP

A.    Kesimpulan

1.Tujuan pewarnaan :

Memberi warna pada sel-sel atau bagian-bagian lain, sehingga menambah daya kontras dan tampak lebih jelas, membedakan sel bakteri satu dengan dengan yang lain, mengidentifikasi bagian-bagian atau struktur-struktur sel mikroorganisme, mengamati dengan lebih baik suatu morfologi mikroorganisme.

2. Dasar pewarnaan bakteri ada 2 yaitu pewarna asam dan pewarna basa.

3. Macam-macam pewarnaan yang digunakan dalam pewarnaan sel bakteri adalah pewarnaan sederhana, pewarnaan khusus, pewarnaan differential dan pewarnaan negatif.

v  Pewarnaan sederhana digunakan untuk mengetahui bentuk morfologis bakteri ( coccus,basilus, dan spiral ) dan susunannya ( rantai, berkelompok, berpasangan, dan tetrad )

v  Pewarnaan differential adalah untuk membedakan sifat bakteri. Ada 2 macam yaitu pewarnaan Gram dan Pewarnaan ZN (Ziehl Neelsen)

v  Pewarnaan khusus terdiri dari pewarnaan spora, granula volutin, flagel dan kapsul.

v  Pewarnaan negatif adalah pewarnaan yang digunakan untuk mewarnai latar belakangnya sedangkan sel bakteri tidak terwarnai.

B.     Saran

Diharapkan setelah membaca makalah ini,pembaca mengetahui dan memhami definisi pewarnaan dan jenis-jenis teknik pewarnaan.

DAFTAR PUSTAKA

Anonim. 2012. Pewarnaan negatif pewarnaan burry.

Gandasoebrata,R. 2009. Penuntun Laboratorium Klinik. Jakarta: Dian Rakyat.

Dwidjoseputro, D.2005. Dasar- dasar Mikrobiologi. Jakarta: PT Penerbit Djambatan.

G.Cappucino James dan Sherman Natalie.2013.Manual Laboratorium Mikrobiologi.Jakarta:Penerbit buku